反轉(zhuǎn)錄差異顯示技術(shù)（DDRT

時間：2016/2/22閱讀：797

摘要: 運用mRNA反轉(zhuǎn)錄差異顯示技術(shù)可以了解不同細(xì)胞或同類細(xì)胞在不同發(fā)育階段、不同生理狀態(tài)下的基因表達狀況，為研究生命活動過程提供重要信息。文章對差異顯示反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)的基本原理,優(yōu)點與缺點,以及近年來對該技術(shù)涉及的RT-PCR方法、引物設(shè)計、PCR反應(yīng)參數(shù)、電泳及差異條帶的顯示方法以及雜交方式進行了論述和評價，并對其應(yīng)用前景進行了簡單分析。

關(guān)鍵詞：反轉(zhuǎn)錄差異顯示PCR;反向northern印跡;銀染 

基因的差異性表達不僅是細(xì)胞形態(tài)和功能多樣性的根本原因，而且也是各種生理及病變過程的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此，分離、鑒定差異表達的基因具有重要的意義。真核生物基因組中，僅約10％～15％的基因在細(xì)胞中表達，而且不同發(fā)育階段、不同生理狀態(tài)和不同類型的細(xì)胞中表達的基因也不盡相同。1992年美國哈佛醫(yī)學(xué)院的兩名科學(xué)家Liang P和Pardee A D 根據(jù)高等生物成熟的mRNA都帶有poly(A)的特性，用特定的錨定引物反轉(zhuǎn)錄后，進行PCR擴增，建立了mRNA差異顯示技術(shù)，由此可見其實用性和廣泛性。DDRT-PCR的優(yōu)點可概括為3SRV(simplicity,sensitivity,speed,reproducibility,versatility)[3]：①簡單，技術(shù)上僅僅依靠PCR和DNA測序膠電泳；②可以同時分析多組樣品；③靈敏性高，僅需0.2 μg總RNA作為起始材料，可檢出低豐度mRNA；④實驗周期短，約8 d即可完成，便于重復(fù)；⑤zui突出的優(yōu)點是實驗過程中可步步驗證比較；⑥可進行多基因家族的表達分析。

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