簡單序列長度多態(tài)性(simple sequence length polymorphism,SSLP)是據(jù)串聯(lián)重復排列微衛(wèi)星基序兩側的單一序列設計引物,對微衛(wèi)星序列(microsalite DNA或simple sequence repeats,SSR)進行擴增,由微衛(wèi)星基序重復數(shù)目的變異而產(chǎn)生多態(tài)性。由于基因組中某一特定的微衛(wèi)星的側翼序列通常都是保守性較強的單一序列,因而可以將微衛(wèi)星側翼的dna片段克隆、測序,然后根據(jù)微衛(wèi)星的側翼序列就可以人工合成引物進行pcr擴增,從而將單個微衛(wèi)星位點擴增出來。
由于單個微衛(wèi)星位點重復單元在數(shù)量上的變異,個體的擴增產(chǎn)物在長度上的變化就產(chǎn)生長度的多態(tài)性,這一多態(tài)性稱為SSLP,每一擴增位點就代表了這一位點的一對等位基因。SSLP是一些長度不等的重復序列、有多個等位基因位點,它們多為2-4個核苷酸序列重復(也叫微衛(wèi)星標記),在不同動植物品系中其重復次數(shù)不同,故可用PCR法來檢測各該多態(tài)性序列的長度,從而快速測定出多種回交后代中標記物的分離方式。
由于微衛(wèi)星標記在基因組中廣泛分布,等位性變異豐富,檢測手段簡便,穩(wěn)定可靠而受重視,但是微衛(wèi)星標記要求已知微衛(wèi)星兩側單一序列信息而使其發(fā)展受到限制,同時微衛(wèi)星標記具有嚴格的種屬特異性也使其應用上受到限制。
間簡單序列重復(inter-simple sequence repeats,ISSR)是近年發(fā)展起來的一類新型分子標記技術,它是根據(jù)基因組內廣泛存在的微衛(wèi)星基序設計單一引物,對基因組DNA進行擴增,擴增的指紋圖可以同時提供基因組內多個位點的序列信息。ISSR標記是根據(jù)微衛(wèi)星基序設計單一通用引物對基因組DNA進行擴增而獲得擴增指紋圖,它在保留了SSLP標記的優(yōu)點的同時,有效地克服了SSLP標記中的設計困難的缺點,可望更好地用于作物分類進化,基因定位和基因的分子標記輔助選擇研究。
Akagi等用UBC-835對水稻包臺型細胞質雄性不育系MTC-10A和其近等基因系MTC-10R進行擴增時發(fā)現(xiàn)指紋圖具多態(tài)性,連鎖分析表明多態(tài)性片段與包臺型細胞質雄性不育恢復基因Rf-1的遺傳距離為3.7±1.1 cM,且定位于第10號染色體的長臂上。本研究指在用UBC-835對野敗型細胞質雄性不育系珍汕97A和其強恢復系IR24進行擴增,并進行SSLP和ISSP的標記分析。
ISSR標記是據(jù)基因組中廣泛存在的微衛(wèi)星序列設計通用引物對基因組DNA進行PCR擴增,引物可以是微衛(wèi)星基序本身或微衛(wèi)星基序重復引物3′或5′加上2-4個錨定堿基。ISSR標記和SSLP標記都是檢測基因組中微衛(wèi)星序列變異,由于微衛(wèi)星序列不具有結構基因的功能,而且重復單元的重復次數(shù)的改變對整個生物體而言是微小的變異,所以在生物進化過程中積累了豐富的微衛(wèi)星變異,這就決定ISSR標記和SSLP標記的較高多態(tài)性水平。ISSR標記在具備較高多態(tài)性水平的情況下克服了SSLP標記設計較困難的缺點,可望更好地用于基因定位研究。ISSR比AFLP具有更高的多態(tài)性比率。SSLP標記比RAPD標記更能提示遺傳材料間多樣性。