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上海西格生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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ELISA檢測方法優(yōu)缺點(diǎn)分述

時(shí)間:2025/2/26閱讀:15
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  ELISA檢測主要方法有直接法、間接法、雙抗體夾心法和競爭法。
 
  1、直接法(direct ELISA)
 
  將抗原直接固定在固相載體上,參加酶符號(hào)的一級(jí)抗體,即可測定抗原總量,此一級(jí)抗體的特異性非常重要。
 
  優(yōu)勢:操作手續(xù)簡略,因無須運(yùn)用二抗可防止交互反響。
 
  缺陷:實(shí)驗(yàn)中的一抗都得用酶符號(hào),但不是每種抗體都適合做符號(hào),費(fèi)用相對(duì)進(jìn)步。
 
  2.間接法(indirect ELISA)
 
  此測定辦法與直接法相似,不一樣在于一級(jí)抗體沒有酶符號(hào),改用酶符號(hào)的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來測定抗原量。
 
  優(yōu)勢:二抗能夠加強(qiáng)信號(hào),并且有多種挑選能做不一樣的測定剖析。不加酶符號(hào)的一級(jí)抗體則能保存它最多的免疫反響性。
 
  缺陷:交互反響發(fā)作的機(jī)率較高。
 
  3.雙抗體夾心法(sandwich ELISA)
 
  被檢測的抗原包被在兩個(gè)抗體之間,其間一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個(gè)則是檢測抗體,此抗體可用酶符號(hào)后直接測定抗原的量;或不符號(hào),再透過酶符號(hào)的二級(jí)抗體來測定抗原的量。這兩種抗體有必要當(dāng)心選擇,才可防止交互反響或競爭一樣的抗原聯(lián)系部位。
 
  優(yōu)勢:高活絡(luò)、高專一性,抗原無須事前純化。
 
  缺陷:抗原必定得具有兩個(gè)以上的抗體聯(lián)系部位。
 
  4.競爭法(competitive ELISA)
 
  樣本里的抗原(自在抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一同競爭一樣的抗體,當(dāng)樣品里的自在抗原越多,就能夠聯(lián)系越多的抗體,而固定抗原就只能聯(lián)系到較少的抗體,反之亦然。經(jīng)清潔過程,洗去自在抗原和抗體的復(fù)合物,只留下固定抗原和抗體的復(fù)合物,拿來與只要固定抗原的對(duì)照組成果相比擬,依據(jù)呈色區(qū)別就可計(jì)算出樣品里的抗原含量。
 
  優(yōu)勢:可適用比擬不純的樣本,并且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
 
  缺陷:全體的敏感性和專一性都較差。
 

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