產(chǎn)品名稱：傘枝梨頭霉探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
英文名稱：Absidia corymbifera
貨號(hào)：XG01P3214
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。

實(shí)時(shí)定量PCR：
①β-actin陽(yáng)性模板的標(biāo)準(zhǔn)梯度制備 陽(yáng)性模板的濃度為1011，反應(yīng)前取3μl按10倍稀釋（加水27μl并充分混勻）為1010，依次稀釋至109、108、107、106、105、104，以備用。
②反應(yīng)體系如下：
標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)體系
序號(hào)  反應(yīng)物  劑量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  陽(yáng)性模板上游引物F  0.5μl
3  陽(yáng)性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  陽(yáng)性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

基因反應(yīng)體系：
序號(hào)  反應(yīng)物  劑量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  內(nèi)參照上游引物F  0.5μl
3  內(nèi)參照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待測(cè)樣品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
③制備好的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)樣本同時(shí)上機(jī)，反應(yīng)條件為：93℃　2分鐘，然后93℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，共40個(gè)循環(huán)。
PCR特異性：
1.primers design
這是重要的一步。理想的，只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件：
1)足夠長(zhǎng)，18～24bp，以保證特異性，當(dāng)然，不是說(shuō)越長(zhǎng)越好，太長(zhǎng)的primer同樣會(huì)降低特異性，并且降低產(chǎn)量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中間序列要多GC，以增加穩(wěn)定性；
4)避免3'端GCrich，個(gè)BASE不要有GC，或者5個(gè)有3個(gè)不要是GC。
5)避免3'端的互補(bǔ)，否則，容易造成DIMER；
6)避免3'端的錯(cuò)配；
7)避免內(nèi)部形成二級(jí)結(jié)構(gòu)；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值時(shí)不算，但在檢測(cè)互補(bǔ)和二級(jí)結(jié)構(gòu)要加上它們；
9)使用兼并primer時(shí)，要參考密碼子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用較高的primer濃度(1μM～3μM)；
10)學(xué)會(huì)使用一種design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

1-二茚酮99%Anti-NADPHoxidase4antibody[UOTR1B493]

二酰97%Anti-NADPHoxidase4antibody[UOTR1B493]

4-硝基肉桂98%Anti-NADPHoxidase4antibody[UOTR1B493]

苯二98%Anti-TEF1/TEAD-1antibody[EPR5278(2)]

3,4,5-三氧基肉桂99%Anti-TEF1/TEAD-1antibody[EPR5278(2)]

二苯基（2，4，6-三基苯?；╈?7%Anti-TEF1/TEAD-1antibody[EPR5278(2)]

槲皮素,二水97%Anti-ALDH2antibody[EPR4494]

槲皮素分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98.5%Anti-ALDH2antibody[EPR4494]

槲皮素97%Anti-ALDH2antibody[EPR4494]

槲皮素,二水分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%(HPLC)Anti-MaltoseBindingProteinantibody[EPR4745]

L-鼠李糖，一水99%Anti-MaltoseBindingProteinantibody[EPR4745]

二脲98%Anti-MaltoseBindingProteinantibody[EPR4745]

4,5-二鄰苯二胺98%Anti-NSEantibody[EPR3378]

酰肼90%Anti-NSEantibody[EPR3378]

鄰苯胺98%Anti-NSEantibody[EPR3378]
傘枝梨頭霉探針?lè)晒舛縋CR試劑盒BOC-L-環(huán)己基甘氨98%Anti-ACY-1antibody[EPR8444]

BOC-D-環(huán)己基甘氨98%Anti-MethylmalonylCoenzymeAmutaseantibody[EPR7738]

BOC-L-環(huán)基氨BRAnti-MethylmalonylCoenzymeAmutaseantibody[EPR7738]

BOC-D-環(huán)基氨BRAnti-MethylmalonylCoenzymeAmutaseantibody[EPR7738]

BOC-L-高苯氨BRAnti-eIF3eantibody[EPR6878(2)]

BOC-D-高苯氨BRAnti-eIF3eantibody[EPR6878(2)]

BOC-D-絲氨酯98%Anti-eIF3eantibody[EPR6878(2)]

DL-半胱氨鹽鹽,一水98%Anti-ThromboxaneA2receptor/TBXA2Rantibody[EPR7336]

DL-胱氨鹽鹽98%Anti-ThromboxaneA2receptor/TBXA2Rantibody[EPR7336]

DL-胱氨98%Anti-ThromboxaneA2receptor/TBXA2Rantibody[EPR7336]

L-瓜氨98%Anti-RPL13antibody[EPR8828]

羧芐霉素鈉USP級(jí)Anti-RPL13antibody[EPR8828]

D-環(huán)基氨BRAnti-RPL13antibody[EPR8828]

L-環(huán)基氨BRAnti-PEX7antibody[EPR7714(2)(B)]

DL-環(huán)基氨BRAnti-PEX7antibody[EPR7714(2)(B)]

熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。