產(chǎn)品名稱：地衣形芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Bacillus licheniformis
貨號(hào)：XG01P3308
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。

實(shí)時(shí)定量PCR：
①β-actin陽性模板的標(biāo)準(zhǔn)梯度制備 陽性模板的濃度為1011，反應(yīng)前取3μl按10倍稀釋（加水27μl并充分混勻）為1010，依次稀釋至109、108、107、106、105、104，以備用。
②反應(yīng)體系如下：
標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)體系
序號(hào)  反應(yīng)物  劑量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  陽性模板上游引物F  0.5μl
3  陽性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  陽性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

基因反應(yīng)體系：
序號(hào)  反應(yīng)物  劑量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  內(nèi)參照上游引物F  0.5μl
3  內(nèi)參照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待測樣品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標(biāo)準(zhǔn)品和檢測樣本同時(shí)上機(jī)，反應(yīng)條件為：93℃　2分鐘，然后93℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，共40個(gè)循環(huán)。
PCR特異性：
1.primers design
這是重要的一步。理想的，只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件：
1)足夠長，18～24bp，以保證特異性，當(dāng)然，不是說越長越好，太長的primer同樣會(huì)降低特異性，并且降低產(chǎn)量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中間序列要多GC，以增加穩(wěn)定性；
4)避免3'端GCrich，個(gè)BASE不要有GC，或者5個(gè)有3個(gè)不要是GC。
5)避免3'端的互補(bǔ)，否則，容易造成DIMER；
6)避免3'端的錯(cuò)配；
7)避免內(nèi)部形成二級(jí)結(jié)構(gòu)；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值時(shí)不算，但在檢測互補(bǔ)和二級(jí)結(jié)構(gòu)要加上它們；
9)使用兼并primer時(shí)，要參考密碼子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用較高的primer濃度(1μM～3μM)；
10)學(xué)會(huì)使用一種design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

非那西汀≥98.0%(HPLC)Anti-SIRT2antibody[EPR1667]

4-氨基苯-3-磺98%Anti-GSTK1antibody[EPR1939]

2-氨基-4-氯-5-基苯磺98%Anti-GSTK1antibody[EPR1939]

對(duì)苯胺AR,99.0%Anti-GSTK1antibody[EPR1939]

1-氨基茚滿98%Anti-CD5antibody[EPR2953]

托品98%Anti-CD5antibody[EPR2953]

6-姜酚分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-CD5antibody[EPR2953]

卵脂fromsoybean,>98%Anti-CyclinD1antibody[EPR2241]-C-terminal

卵脂fromsoybean,>90%Anti-CyclinD1antibody[EPR2241]-C-terminal

卵脂fromsoybean,>70%Anti-CyclinD1antibody[EPR2241]-C-terminal

液體石蠟CPAnti-IL-15antibody[EPR1542Y]

液體石蠟ARAnti-IL-15antibody[EPR1542Y]

液體石蠟色譜固定液，80℃Anti-IL-15antibody[EPR1542Y]

液體石蠟USP級(jí)Anti-Integrinbeta1antibody[EPR1040Y]

液體石蠟分子生物學(xué)級(jí)Anti-Integrinbeta1antibody[EPR1040Y]
地衣形芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒焦碳二酯98%Anti-GGHantibody[EPR8014]

二赤鮮醇99%Anti-CYP7B1antibody[EPR8395]

二赤蘚醇用于分子生物學(xué),≥99%Anti-CYP7B1antibody[EPR8395]

β-甘油鈉98%，五水Anti-CYP7B1antibody[EPR8395]

二氨基基纖維素預(yù)溶脹，細(xì)顆粒Anti-non-muscleMyosinIIAantibody[EPR8965]

二氨基基纖維素纖維狀，快流速Anti-non-muscleMyosinIIAantibody[EPR8965]

二氨基基纖維素TLCAnti-non-muscleMyosinIIAantibody[EPR8965]

二氨基基纖維素N-300TLCAnti-ZNF575antibody[EPR9027]

葡聚糖鈉鹽分子量500000，無DNA酶/RND酶/蛋白酶Anti-ZNF575antibody[EPR9027]

鮭魚精DNATypeII-SAnti-ZNF575antibody[EPR9027]

2’-脫氧腺苷≥99.0%(HPLC)Anti-SNAP29antibody[EPR9199]

三脫氧鳥苷鈉鹽98%Anti-SNAP29antibody[EPR9199]

三脫氧鳥苷溶液dGTP,100mM溶液,pH7.0Anti-SNAP29antibody[EPR9199]

dNTP套裝100mM溶液,pH7.0Anti-Alpha-synucleinantibody[MJFR1]

癸基吡喃葡萄糖苷BCAnti-TROYantibody[EPR3213(2)]

熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。