注意事項:
1. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為冷凍組織，應盡量避免反復凍融，否則會導致模板的降解，影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間，也可在37℃水浴中預熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。
3. 電泳檢測時，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶，影響實驗結果。
4. 建議擴增片段長度1 kb以內，以便擴增效率佳。
5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

產品特點:
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

樣品RNA的抽提：

①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 ?g RNA/ml。樣品RNA濃度(?g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 ?g/ml。

樣品cDNA合成:
①反應體系
序號  反應物  劑量
1  逆轉錄buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆轉錄酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  總體積  10μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
②混合液在加入逆轉錄酶MMLV 之前先70℃干浴3分鐘，取出后立即冰水浴至管內外溫度一致，然后加逆轉錄酶0.5μl，37℃水浴60分鐘。
③取出后立即95℃干浴3分鐘，得到逆轉錄終溶液即為cDNA溶液，保存于-80℃待用。
具體計算如下：
RNA溶于40 ?l DEPC水中，取5ul，1:100稀釋至495?l的TE中，測得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 ?g/ml = 840 ?g/ml 或 0.84 ?g/?l
取5ul用來測量以后，剩余樣品RNA為35 ?l，剩余RNA總量為：35 ?l × 0.84 ?g/?l = 29.4 ?g
②純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度，比值范圍1.8到2.1。
2）變性瓊脂糖凝膠電泳測定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中，冷卻至60℃，10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% (12.3 M)。10×MOPS電泳緩沖液
濃度  成分
0.4M  MOPS，pH 7.0
0.1M  乙酸鈉
01M  EDTA
灌制凝膠板，預留加樣孔至少可以加入25 ?l溶液。膠凝后取下梳子，將凝膠板放入電泳槽內，加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。
②準備RNA樣品
取3?gRNA，加3倍體積的甲醛上樣染液，加EB于甲醛上樣染液中至終濃度為10?g/ml。加熱至70℃孵育15分鐘使樣品變性。
③電泳
上樣前凝膠須預電泳5min，隨后將樣品加入上樣孔。5-6V/cm電壓下2h，電泳至溴酚蘭指示劑進膠至少2-3cm。
④紫外透射光下觀察并拍照
28S和18S核糖體RNA的帶非常亮而濃（其大小決定于用于抽提RNA的物種類型），上面一條帶的密度大約是下面一條帶的2倍。還有可能觀察到一個更小稍微擴散的帶，它由低分子量的RNA（tRNA和5S核糖體RNA）組成。在18S和28S核糖體帶之間可以看到一片彌散的EB染色物質，可能是由mRNA和其它異型RNA組成。RNA制備過程中如果出現(xiàn)DNA污染，將會在28S核糖體RNA帶的上面出現(xiàn)，即更高分子量的彌散遷移物質或者帶，RNA的降解表現(xiàn)為核糖體RNA帶的彌散。用數(shù)碼照相機拍下電泳結果。

庚烯酯98%Anti-ANO9antibody

庚烯酯≥97%,FCC,Kosher,FGAnti-TPATissuePlasminogenActivatorantibody

己烯酯≥98%,FCC，F(xiàn)GAnti-LRRK2(phosphoT1491)antibody[MJFR5-88-3]

己烯酯98%Anti-LRRK2(phosphoT1410)antibody[MJFR4-25-5]

苯氧烯酯≥99%,FGAnti-PNKDantibody

苯氧烯酯98%Anti-LSSantibody[EPR6703]

烯醇CP,98.0%（劇）Anti-LSSantibody[EPR6703]

烯胺98%（?。〢nti-LSSantibody[EPR6703]

草毒死分析標準品Anti-GNAI1antibody[EPR9441(B)]

二烯草胺Anti-GNAI1antibody[EPR9441(B)]

1-溴-3-烷99%Anti-GNAI1antibody[EPR9441(B)]

溴烷98%Anti-Sterolcarrierprotein2antibody[EPR9022]

3-溴-1-醇97%Anti-Sterolcarrierprotein2antibody[EPR9022]

2-吡99%Anti-Sterolcarrierprotein2antibody[EPR9022]

6--1-己醇95%Anti-DAminoAcidOxidaseantibody[EPR7555]
球孢白僵菌探針法熒光定量PCR試劑盒三(羥基)氨基烷鹽鹽99%Anti-TRIFantibody[OTI1G7]

三(羥基)氨基烷鹽鹽超純級Anti-MAGEA4antibody[OTI1F9]

用于分子生物學和細胞培養(yǎng)，≥99.0%(AT)Anti-PI3Kinasecatalyticsubunitgamma/PI3K-gammaantibody[OTI4H9]

N-基-N-（2-羥基-3-磺基）-3-基苯胺鈉鹽99%Anti-TET3antibody

N-三(羥基)基-3-氨基磺99%Anti-CTAG1Bantibody[4D8]

N-三(羥基)基-3-氨基磺≥99.5%(T)Anti-MEK1antibody[OTI4E1]

用于細胞培養(yǎng)級,≥99.5%(T)Anti-GBASantibody[OTI1B8]

八烷基三基化銨99%Anti-InfluenzaAVirusHemagglutininantibody[AT1B7]

2,4,6-三溴-3-羥基苯98%Anti-CD90/Thy1antibody[5E10](Allophycocyanin)

N-三(羥基)氨基-2-羥基磺99%Anti-MHCClassIIantibody[M5/114]

N-三(羥基)氨基-2-羥基磺超純級Anti-TCRalpha+TCRbetaantibody[R73]

N-(3-磺基)-3,3',5,5'-四基聯(lián)苯胺鈉鹽99%Anti-hnRNPLantibody

三(羥基)基甘氨forcellculture，≥99.5%(T)Anti-CytosolicPhospholipaseA2antibody

Biologicalstain，生化試級Anti-Kir6.2/BIRantibody

Biologicalstain，生化試級Anti-GAD67antibody