PCR特異性：
1.primers design
這是重要的一步。理想的，只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件：
1)足夠長(zhǎng)，18～24bp，以保證特異性，當(dāng)然，不是說(shuō)越長(zhǎng)越好，太長(zhǎng)的primer同樣會(huì)降低特異性，并且降低產(chǎn)量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中間序列要多GC，以增加穩(wěn)定性；
4)避免3'端GCrich，個(gè)BASE不要有GC，或者5個(gè)有3個(gè)不要是GC。
5)避免3'端的互補(bǔ)，否則，容易造成DIMER；
6)避免3'端的錯(cuò)配；
7)避免內(nèi)部形成二級(jí)結(jié)構(gòu)；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值時(shí)不算，但在檢測(cè)互補(bǔ)和二級(jí)結(jié)構(gòu)要加上它們；
9)使用兼并primer時(shí)，要參考密碼子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用較高的primer濃度(1μM～3μM)；
10)學(xué)會(huì)使用一種design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

客戶只需提供樣品和待檢測(cè)基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計(jì)并合成引物，完成熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告給您。

產(chǎn)品特點(diǎn):
靈敏度高：可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號(hào)強(qiáng)

熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
實(shí)時(shí)定量PCR：
①β-actin陽(yáng)性模板的標(biāo)準(zhǔn)梯度制備 陽(yáng)性模板的濃度為1011，反應(yīng)前取3μl按10倍稀釋（加水27μl并充分混勻）為1010，依次稀釋至109、108、107、106、105、104，以備用。
②反應(yīng)體系如下：
標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)體系
序號(hào)  反應(yīng)物  劑量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  陽(yáng)性模板上游引物F  0.5μl
3  陽(yáng)性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  陽(yáng)性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

層粘連蛋白β1(LAMβ1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Laminin Beta 1 (LAMb1)

GN增菌液 規(guī)格： 250g 用途： 用于革蘭氏性菌的選擇性培養(yǎng)，特別是志賀氏菌和沙門(mén)氏菌的增菌培養(yǎng)(GB/T4789.28－2003 中4.17，...

人甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

緩沖李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)添加劑/Buffered Listeria Enrichment Broth Supplement加入225ml緩沖李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)中5毫升國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

煌綠增菌液/亮綠增菌液/亮綠肉湯/Brilltant Green Enrichment Broth蛋與蛋制品中沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

假單胞F瓊脂/Pseudomonas Agar F銅綠（綠膿）假單胞菌色素生成試驗(yàn)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

堿性膽鹽瓊脂/AB瓊脂/Alealine Bile Salt Agar分離霍亂弧菌250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

酵母粉葡萄糖瓊脂/YGC瓊脂/YGC Agar食品中霉素及酵母菌總數(shù)測(cè)定250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

酵母浸出膏/酵母浸膏/酵母提取物/酵母萃取物/酵母抽提物/水溶性酵母浸膏/Yeast extractBR500克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

金黃色葡萄球顯色培養(yǎng)基配套平皿/Staphylococcus Chromogenic Medium Dish9㎝/塊國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

聚蛋白胨/多聚蛋白胨/多價(jià)蛋白胨/PolypeptoneBR250/500/1000克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

尿素酶發(fā)酵管BR20支國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

小鼠成肌細(xì)胞英文名稱：C2C12
寄生水霉探針?lè)晒舛縋CR試劑盒人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基Tissue-type Plasiminogen Actilyse*96T

人角膜成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基Tissue factor現(xiàn)貨供應(yīng)96T

人小梁網(wǎng)細(xì)胞*培養(yǎng)基Tissue factor pathway inhibitor*96T

人視網(wǎng)膜muller細(xì)胞*培養(yǎng)基Tissue factor pathway inhibitor 2上海直銷96T

人角膜內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基LAsparaginase*96T

人脈絡(luò)膜微血管細(xì)胞*培養(yǎng)基L-Carnitine現(xiàn)貨供應(yīng)96T

人牙周膜成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基Leu-enkephalin*96T

大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基M-enkephalin上海直銷96T

大鼠肺血管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基Depakine*96T

大鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基Tegratol現(xiàn)貨供應(yīng)96T

基因反應(yīng)體系：
序號(hào)  反應(yīng)物  劑量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  內(nèi)參照上游引物F  0.5μl
3  內(nèi)參照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待測(cè)樣品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
③制備好的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品和檢測(cè)樣本同時(shí)上機(jī)，反應(yīng)條件為：93℃　2分鐘，然后93℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，共40個(gè)循環(huán)。