產(chǎn)品名稱：鮭腎桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Renibacterium salmoninarum
貨號：XG01P4027
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

實時定量PCR：
①β-actin陽性模板的標準梯度制備 陽性模板的濃度為1011，反應(yīng)前取3μl按10倍稀釋（加水27μl并充分混勻）為1010，依次稀釋至109、108、107、106、105、104，以備用。
②反應(yīng)體系如下：
標準品反應(yīng)體系
序號  反應(yīng)物  劑量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  陽性模板上游引物F  0.5μl
3  陽性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  陽性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

基因反應(yīng)體系：
序號  反應(yīng)物  劑量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  內(nèi)參照上游引物F  0.5μl
3  內(nèi)參照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待測樣品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標準品和檢測樣本同時上機，反應(yīng)條件為：93℃　2分鐘，然后93℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，共40個循環(huán)。
PCR特異性：
1.primers design
這是重要的一步。理想的，只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件：
1)足夠長，18～24bp，以保證特異性，當(dāng)然，不是說越長越好，太長的primer同樣會降低特異性，并且降低產(chǎn)量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中間序列要多GC，以增加穩(wěn)定性；
4)避免3'端GCrich，個BASE不要有GC，或者5個有3個不要是GC。
5)避免3'端的互補，否則，容易造成DIMER；
6)避免3'端的錯配；
7)避免內(nèi)部形成二級結(jié)構(gòu)；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值時不算，但在檢測互補和二級結(jié)構(gòu)要加上它們；
9)使用兼并primer時，要參考密碼子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用較高的primer濃度(1μM～3μM)；
10)學(xué)會使用一種design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

Saos-2(人骨肉瘤細胞)銅綠假單胞菌 Pseudomonas aeruginosa

豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

COLO 201(人結(jié)直腸腺細胞)HSC-T6(大鼠肝星形細胞)

康寧木霉嗜酸酸菌 Lactobacillus acidophilus

SGC-7901, 人胃腺細胞系Lec1(倉鼠卵巢細胞)

香菇 Lentinula edodes黑曲霉 Aspergillus niger

屎腸球菌 Enterococcus faeciumHBE, 正常人支氣管上皮細胞系

大豆慢生根瘤菌釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

RH-35(大鼠肝細胞)釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

小鼠關(guān)節(jié)軟骨細胞*培養(yǎng)基苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

BC-022(人腺細胞)HO-8910PM(人高轉(zhuǎn)移卵巢細胞)

鉤狀木霉小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞*培養(yǎng)基

植物桿菌 Lactobacillus plantarumKU812(人外周血嗜堿性白血病細胞)
鮭腎桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒QG56(人肺扁平上皮癌細胞) 5×106cells/瓶×2 L02(正常肝細胞)

TIGIT Others Mouse 小鼠 TIGIT / VSTM3 人細胞裂解液 (陽性對照)

RNF142英文名稱：GPR14磷化神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43抗體

CL0223SW480(人結(jié)腸癌細胞)5×106cells/瓶×2

WEHI231小鼠B淋巴細胞 WEHI231 B lymphocyte in mice DMEM+10% FBS+0.05mM βMercaptoethanol

SYT3英文名稱：Urocortin糖原合酶激酶3β抗體

GPR37 Others Human 人 GPR37 人細胞裂解液 (陽性對照)

IL23 Protein Mouse 重組小鼠 IL23 (IL23A & IL12B Heterodimer) 蛋白

SNAP25英文名稱：FUT3/CD174抗粘附多肽抗體

熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。