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當前位置:上海西格生物科技有限公司>>細胞培養(yǎng)>>細胞株>> MRC-5人胚肺成纖維細胞
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所 在 地上海市
更新時間:2020-10-19 10:04:55瀏覽次數(shù):294次
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MRC-5人胚肺成纖維細胞 | T25m2 | XG-X6350 |
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株;(2)細胞株數(shù)量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮細胞株,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
收到細胞如何處理?
1、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
公司產(chǎn)品采用干冰運輸,經(jīng)過逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時停止其生命活動,保存其活性,使您的實驗更生動,公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.
(-)-Diisopinocampheyl chloroborane酮中乙烯利溶液標準物質(zhì)anti- AGXT2L2 antibody人結(jié)核菌桿抗體IgG(TB-Ab IgG)ELISA試劑盒
(-)-ALPHA-CUBEBENE酮中溴螨酯溶液標準物質(zhì)anti- AHCY antibody人庚型肝炎病IgM(HGV-IgM)ELISA試劑盒
1-Naphthaldehyde;酮中克菌丹溶液標準物質(zhì)anti- AHCY antibody人戊型肝炎病IgM(HEV-IgM)ELISA試劑盒
AMMoniuM citrate dibasic;AMMoniuM hydrogen citrate;Citric acid diaMMoniuM salt酮中草胺溶液標準物質(zhì)anti- AHCYL1 antibody人戊型肝炎病IgG(HEV-IgG)ELISA試劑盒
tributyl(lauroyloxy)stannane酮中硫克威溶液標準物質(zhì)anti- AHI1 antibody人型肝炎IgM(HDV IgM)ELISA試劑盒
PHENANTHROLINE RUTHENIUM DICHLORIDE, HYDRATE酮中硫克威溶液標準物質(zhì)anti- AHNAK antibody人型肝炎IgG(HDV IgG)ELISA試劑盒
AMMONIUM SALICYLATE酮中稻散溶液標準物質(zhì)anti- AHR antibody人型肝炎IgM(HCV-IgM)ELISA試劑盒
PALLADIUM(II) NITRATE HYDRATE酮中敵稗溶液標準物質(zhì)anti- AHSA1 antibody人型肝炎IgG(HCV-IgG)ELISA試劑盒
MRC-5人胚肺成纖維細胞Human MUC1 (Mucin 1) ELISA Kit乳腺腫瘤新因子1抗體anti- PFKP antibody干細胞因子(SCF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human CABIN1 (Calcineurin Binding Protein 1) ELISA Kit 25α7羥化酶抗體anti- PFN2 antibody干細胞因子(SCF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human CaN (Calcineurin) ELISA Kit24羥化酶抗體anti- PFTK1 antibody干細胞因子(SCF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human CGRP (Calcitonin Gene Related Peptide) ELISA Kit細胞角蛋白3+12抗體anti- PGAM1 antibody干細胞因子(SCF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human CTR (Calcitonin Receptor) ELISA Kit 細胞色素P450 17抗體anti- PGAM1 antibody干細胞因子(SCF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human CaSR (Calcium Sensing Receptor) ELISA Kit 細胞色素P450 7A1抗體/7a羥化酶anti- PGAM2 antibody基質(zhì)細胞衍生因子1(SDF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human CACYBP (Calcyclin Binding Protein) ELISA Kit 碳酸酐酶9抗體anti- PGAM2 antibody轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Human CALD (Caldesmon) ELISA Kit酸化細胞周期檢測點激酶2抗體anti- PGAP1 antibody轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
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