10min病毒DNA/RNA提取試劑盒

該取試劑盒采用裂解液，可快速可靠的從糞便、淋巴液、血清、血漿樣本中純化出高純度的病毒 DNA/RNA。應用本試劑盒提取的 DNA/RNA 可直接用于反轉錄、One-Step RT-PCR、文庫構建等多種分子生物學實驗。

注意事項：
（1） 首本試劑盒中的 Washing Buffer 中已經加乙醇，無需單獨添加。
（2）Virus DNA/RNA LB1，儲存時可能會有白色結晶沉淀，放置于 56℃水浴鍋溶解后，不影響使用效果。
（3）蛋白酶 K（20 mg/ml）長期保存請儲存于-20℃，短期室溫保存（6 個月），其它組分儲存于室溫。
（4）該試劑盒的保質期為 2 年。
操作方法
（1）在 1.5mL 離心管（自備）中加入 200μL 病毒液 （糞便提取液、血清、血漿等），加入 50μL Virus DNA/RNA LB1和 20μL 蛋白酶 K，漩渦混合均勻，室溫消化 5min。
（2）消化完畢后，向上述樣本中加入 700μL Virus DNA/RNABB2，漩渦混合 1min。
（3）將上述混合液全部倒入到吸附柱中，13000rpm 離心1min。
（5）倒掉廢液。向吸附柱中加入 500μL Washing Buffer，13000rpm 離心 15s。重復此步驟。
（6）將吸附柱重新放回離心機，13000rpm 空離心 1min，將殘留的乙醇甩干。
（7）將吸附柱芯放入到 1.5mLRnase Free 收集管中，向吸附柱芯中加入 30~80μLNucleaseFree，13,000rpm 離心1min，洗脫液即為 DNA/RNA 產物，冷凍保存。

一、模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用，調節(jié)反應pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應特異性，從而提高反應效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導致小片段產物（＜500bp）的增加和長片段、全長產物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。