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1.氨氣商品的氨氣一般用鋼瓶盛裝,使用時(shí)通過減壓裝置可以得到氣態(tài)的氨。氣體的流速可由計(jì)泡計(jì)來控制,其中計(jì)泡計(jì)中含有少量濃氫氧化鉀溶液(12g氫氧化鉀溶于12mL水)。在計(jì)泡計(jì)和反應(yīng)器之間應(yīng)加一安全瓶。通過裝有疏松的堿石灰或塊狀氧化鈣的干燥塔干燥。如果需要少量的氨可以用如下方法制備:在上端裝有回流冷凝管的圓底燒瓶中加入濃氨水,緩慢加熱,氣體通過裝有疏松的堿石灰或塊狀氧化鈣的干燥塔干燥,然后通過安全瓶引入反應(yīng)瓶。2.氨基鈉市售顆粒狀氨基鈉純度為80~90%,氨基鈉不容易研碎,通常在裝有烴類惰性溶劑(
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和人類一樣,我們微生物之間,也會(huì)相互殘殺。某些微生物在生長繁殖過程中,產(chǎn)生的代謝物,能夠抑制其他微生物的生長繁殖。人類把微生物殘殺微生物的現(xiàn)象叫做抗生。19世紀(jì)中期,zui早指出細(xì)菌就是導(dǎo)致傳染病病原的法國科學(xué)家,把抗生叫做“生命抑制了生命”。到了1889年,一位法國化學(xué)家,*次把微生物之間相互殘殺的武器(抗體和活性類代謝物)叫做抗生素。目前已經(jīng)被人類發(fā)現(xiàn)的天然抗生素有上萬種。其中有許多,比如青霉菌產(chǎn)生的青霉素、灰色鏈絲菌產(chǎn)生的鏈霉素,被人類利用了,用來抗生素藥物以殺滅對(duì)他們有害的微生物。生物之
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小鼠胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟
一般培養(yǎng)-保持胚胎干細(xì)胞處于未分化狀態(tài)培養(yǎng)基細(xì)胞復(fù)蘇凍存細(xì)胞明膠包被細(xì)胞傳代體外分化培養(yǎng)基包被有多聚鳥氨酸/纖維結(jié)合蛋白的培養(yǎng)板(使用或不使用蓋玻片)體外分化方法注:以下培養(yǎng)針對(duì)于小鼠的R1胚胎干細(xì)胞系,其它胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng)可以參考。不過人的胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)不可以采用下面的protocol,需要用的protocol和培養(yǎng)基。一般培養(yǎng)--維持ES細(xì)胞處于未分化狀態(tài)ES細(xì)胞培養(yǎng)用含有LIF(白血病抑制因子)和Feed細(xì)胞的培養(yǎng)基(高糖)來阻止細(xì)胞的分化。為細(xì)胞提供包被有0.1%明膠的平板作為粘附細(xì)胞的 -
影響ELISA實(shí)驗(yàn)的因素和對(duì)策
影響ELISA試驗(yàn)效果常見問題原因分析及解決辦法來自Transhold跳轉(zhuǎn)到:導(dǎo)航,搜索ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在科研上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。下面將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下:操作步驟:目錄[隱藏]1選擇試劑:2標(biāo)本收集與保存:3試劑使用中的準(zhǔn)備工作及注意事項(xiàng):4加樣:5溫育:6洗板:7顯色:8終止:9讀板:10全過程:11ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果判斷和數(shù)據(jù)分析選擇試劑:選擇質(zhì) -
免疫組化中抗體選擇要求1、一抗選擇要點(diǎn)(1)選擇單克隆還是多克隆抗體。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一特異抗原決定簇結(jié)合,就象導(dǎo)彈地命中目標(biāo)一樣。另一方面,即使是同一個(gè)抗原決定簇,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應(yīng)中,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)較低;而多克隆抗體特異性稍弱,抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等有所避免)。(2)種屬來源。一般家
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斐林試劑:成分:0.1g/mlNaOH(甲液)和0.05g/mlCuSO4(乙液).用法:將斐林試劑甲液和乙液等體積混合,再將混合后的斐林試劑倒入待測(cè)液,水浴加熱或直接加熱,如待測(cè)液中存在還原糖,則呈磚紅色.班氏糖定性試劑:為藍(lán)色溶液.和葡萄糖混合后沸水浴會(huì)出現(xiàn)磚紅色沉淀.用于尿糖的測(cè)定.雙縮脲試劑:成分:0.1g/mlNaOH(甲液)和0.01g/mlCuSO4(乙液).用法:向待測(cè)液中先加入2ml甲液,搖勻,再向其中加入3~4滴乙液,搖勻.如待測(cè)中存在蛋白質(zhì),則呈現(xiàn)紫色.蘇丹Ⅲ:用法:取蘇丹
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ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在檢測(cè)過程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見到一些錯(cuò)誤的結(jié)果。引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有:①標(biāo)本因素;②試劑因素;③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1.樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽性。因此,國外檢測(cè)血清抗體的試劑盒,均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù),以降低非特異性反應(yīng),使特異性的抗原抗體反應(yīng)
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酶標(biāo)記物包括酶標(biāo)記抗原、酶標(biāo)記抗體和酶標(biāo)記SPA等。酶標(biāo)記物質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到免疫酶技術(shù)的成功與否,因此被稱為關(guān)鍵的試劑。酶標(biāo)記物中zui常用的是酶標(biāo)記抗體,它是將酶與特異性抗體經(jīng)適當(dāng)方法連接而成。酶標(biāo)記抗體的質(zhì)量主要取決于純度好、活性強(qiáng)及親和力高的酶和抗體,其次要有良好的制備方法。目前,高質(zhì)量的酶(如辣根過氧化物酶,簡稱HRP)國內(nèi)已有商品供應(yīng)。高質(zhì)量的抗體則可通過提取純化而獲得。在制備方法上,宜選用產(chǎn)率高、不影響結(jié)合物的活性和不混雜干擾性物質(zhì)且操作簡便易行的方法。一、工作濃度的選擇在免疫酶