描述：(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株；(2)細胞株數(shù)量約 5×105/瓶；(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、公司售后服務(wù)標準。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞，如是新鮮細胞株，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞，客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?lt;2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。

冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細胞培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細胞處理：
1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量*，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

收到細胞如何處理？

1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
公司產(chǎn)品采用干冰運輸，經(jīng)過逐步的降溫，冷藏在-196℃度的液氮罐中，暫時停止其生命活動，保存其活性，使您的實驗更生動,公司代理品牌有：ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等品牌.

Zinc sulfide飼料中鈣、銅、鐵、鎂、錳、鉀、鈉、鋅anti- A2LD1 antibody人集落刺激因子(CSF)ELISA試劑盒

1,2,4-Trimethylbenzene飼料中鉛anti- A4GALT antibody人凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA試劑盒

SeMixylenol orange飼料中粗蛋白質(zhì)、粗灰分、粗脂肪、粗纖維anti- A4GNT antibody人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白(P-cad)ELISA試劑盒

AMido black 10B;Buffalo black NBR;Acid black 1醬油中山梨酸、苯酸anti- AACS antibody人角化細胞生長因子(KGF)ELISA試劑盒

Silica gel,self indicator醬油中氨基酸態(tài)氮、氯化鈉、三氯蔗糖anti- AADACL1 antibody人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)ELISA試劑盒

Silica glass果蔬汁中多效唑、噠螨靈、三唑、敵畏、胺anti- AADAT antibody人淋巴細胞趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA試劑盒

Aesculin;Bicolorin;EnallachroMe;PolychroMe;6,7-DihydroxycouMarin-6-glucoside飲料中環(huán)己基氨基磺酸鈉（以環(huán)己基氨基磺酸計）anti- AAMP antibody人α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒

Adenine;6-AMiH-purine;6-AMino-3H-purine;6-AMino-9H-purine;1H-Purine-6-aMine;1,6-Dihydro-6-iMinopurine;3,6-Dihydro-6-iMinopurine果蔬汁中三唑、敵畏、胺、酰胺anti- AANAT antibody人白介素27(IL-27)ELISA試劑盒

PC-12大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)Human ACHAP (Acetylcholinesterase Associated Protein) ELISA Kit*P450 CYP20A1抗體anti- PAPSS1 antibody血小板衍生生長因子受體α(PDGFRα)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human ACO1 (Aconitase 1) ELISA Kit*P4501B1抗體anti- PAPSS2 antibody血小板衍生生長因子受體β(PDGFRβ)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CPE (Carboxypeptidase E) ELISA Kit *P450 CYP26A1抗體anti- PAQR4 antibody內(nèi)*肽1(EM1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human Anti-GM1 (Anti-Ganglioside M1 Antibody) ELISA Kit酸化周期素E抗體anti- PAR2 antibody尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸酸酶4(NOX4)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human CGα (Chorionic Gonadotropin Alpha Polypeptide) ELISA Kit酸化周期素E2抗體anti- PARD3 antibody胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human Ang-III (Angiotensin III) ELISA Kit周期素M3抗體anti- PARD6B antibody免疫球蛋白樣EGF樣域*激酶1(Tie1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human RARS (Arginyl tRNA Synthetase, cytoplasmic) ELISA Kit周期素Y/X抗體anti- PARK7,DJ-1 antibody免疫球蛋白樣EGF樣域*激酶1(Tie1)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)

Human FGFR3 (Fibroblast Growth Factor Receptor 3) ELISA Kit 酸化周期素D3抗體anti- Parkin antibody反胰島素樣生長因子2(IGF2AS)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)