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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數值為橫軸,繪制標準曲線
本試劑盒不但準確、快速、靈敏,還具有以下特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單。
2. 預期的 PCR 產物長度為 494 bp。
3. 本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
產品名稱 | |
英文名稱 | Mycobacterium avium subspecies paratuberculosisPCR |
貨號 | XG-P1762 |
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
包裝規(guī)格及成分:
編號 | 成分 | 十孔盒包裝(去紙托) |
試劑一 | 2×PCR MagicMix | 1mL(亮黃蓋) |
試劑二 | 源性成分 PCR 引物混合液 | 100 uL(白蓋) |
試劑三 | 源性成分 PCR 陽性對照 | 50 uL(黃蓋) |
試劑四 | 超純水 | 1 mL(本色蓋) |
試劑五 | DNA 釋放劑試用裝 | 50 次(成分見下) |
試劑六 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 50 uL(白蓋) |
試劑七 | 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 100uL(綠蓋) |
試劑八 | 免 DNA 提取試劑溶液 B | 400 uL(紅蓋) |
試劑九 | 使用手冊 | 400 uL(紅蓋) |
技術原理:
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應實驗中發(fā)現,DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。( DNA高溫變性低溫復性)
發(fā)現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。
李氏增菌液LB試劑SR00支每支添加于225ml(026040)中配成LB
亮綠瓊脂 (Kauffmann 培養(yǎng)基) (CM0263) Oxoid incubation media 亮綠瓊脂 (Kauffmann 培養(yǎng)基) (CM0263) Oxoid
三寶壟根霉 作抗菌素效價測定指示菌。 支/瓶
MPC瓊脂培養(yǎng)基250g用于奶制品中菌落總數測定(阻抗法)
BrothmediumD(Lactosemonohydratebroth)2'-DEOXYADENOSINE-5'-TRIPHOSPHATE DISODIUM SALT 三磷酸脫氧腺苷鈉鹽 74299-50-6
2'-Deoxycytidine-5'-triphosphoric acid disodium salt 三磷酸脫氧胞苷鈉鹽 102783-51-7
2'-Deoxyuridine 2'-脫氧尿苷 951-78-0
2'-Deoxyguanosine monohydrate 2ˊ-脫氧鳥苷 961-07-9FCGR2A Others Cynomolgus 食蟹猴 CD32a / FCGR2A 人細胞裂解液 (陽性對照)
間充質干細胞培養(yǎng)基MSCM-acf
F81 貓腎細胞
CM-M046小鼠腸上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
HUVEC-12, 人臍靜脈血管內皮細胞系
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY0905 胎兒皮成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL
鳥分枝桿菌類結核亞型PCR檢測試劑盒EnrichmentbrothmediumE
尿道定位顯色培養(yǎng)基A 1000 mL/瓶 incubation media 尿道定位顯色培養(yǎng)基A 1000 mL/瓶
胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂 250g 廣泛用于細菌的培養(yǎng),特別用于食品中李斯特氏菌的分離培養(yǎng)(GB/T4789.30-2010和SN/T 0184-2005,I...
MH瓊脂(MHA)Mueller-HintonAgar用于抗生素敏感試驗
PYGBrothMediumBase血液增菌培養(yǎng)基/BloodEnrichmentMedium用于血液中致病菌的增菌培養(yǎng)250克國產/進口 進口分裝 色淺灰鏈霉菌 Streptomyces nigrogriseolus
戊烷脒加入戊烷脒多粘菌素瓊脂50毫克國產/進口 進口分裝 疣孢漆菌 Myrothecium verrucaria
水楊苷發(fā)酵管BR20支國產/進口 進口分裝 束叢鏈霉菌 Streptomyces fasciculus
三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基/三糖鐵培養(yǎng)基/TSI瓊脂/TripleSugarIronAgar腸桿菌科細菌的生化試驗250克國產/進口 進口分裝 金直絲鏈霉菌 Streptomyces aureorectusTNFRSF13B Others Human 人 TNFRSF13B / TACI / CD267 人細胞裂解液 (陽性對照)
造骨細胞生長添加物ObGS
CP-88 草魚胚胎細胞
CL-00063T3-L1(小鼠胚胎成纖維細胞)5×106cells/瓶×2
HK-2, 人腎皮質近曲小管上皮細胞
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KM9803 人顱蓋造骨細胞*培養(yǎng)基 100mL
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
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