使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

本試劑盒不但準(zhǔn)確、快速、靈敏，還具有以下特點(diǎn)：
1.  即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單。
2.  預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 494 bp。
3.  本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
包裝規(guī)格及成分：

技術(shù)原理：

       DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。

TryptoseSoyaAgar

7.5%氯肉湯 1000(g) incubation media 7.5%氯肉湯 1000(g)

3.5% NaC1脫羧酶發(fā)酵管 3.5% NaC1脫羧酶發(fā)酵管 20支 BR

ASS瓊脂250用于磺胺類靈敏度試驗(yàn)(WHO方法)incubationmediaASS瓊脂250用于磺胺類靈敏度試驗(yàn)(WHO方法)

CCDAgarAdditive苯磺酸貝托司汀  進(jìn)口分裝  小鼠血清淀粉樣蛋白(mouse SAA)

去甲蝥素  進(jìn)口分裝  細(xì)胞凋亡因子配體 (Fas-Ligand)

染料木素/金雀異黃  進(jìn)口分裝  可溶性 P- 選擇素 (sP-Selectin/ sCD62P)

異連翹酯苷  進(jìn)口分裝  大鼠激活素A(rat Activin A)KLK3 Others Human 人 KLK3 / PSA / Kallikrein-3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人癌細(xì)胞;MDA-MB-231

MT-4 人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞

A-673 人橫紋肌瘤細(xì)胞 A-673 rhabdomyoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS

TDGF1 Protein Human 重組人 Cripto / TDGF1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC 人胰腺星狀細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
差異脲原體PCR檢測試劑盒黏質(zhì)沙雷菌凍干粉

酮叢毛單胞菌

運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單孢菌

束狀刺盤孢

滅蚊鏈霉菌

小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌流醋新每速 NqoMycin Sulfctq 1402-10-3

CALCIUMxy7noXIDE氧化鈣美國藥典級(jí)白色至米白色粉末RTsigma

焦鱗醋鉀 Potcssium pyrophosphctq 730-34-2

熒光素酶/熒光素酶(螢火蟲)/重組型酵素/Luciferase firefly BR，98% 1毫克 國產(chǎn)/進(jìn)口

甘酸鈣/甘酸鈣螯合物/Calcium Glycinate BR，99% 25克 國產(chǎn)/進(jìn)口IGFBP4 Others Cynomolgus 食蟹猴 IGFBP4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞;PC-12 [PC12]

肝竇內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

Hat-78細(xì)胞，人T細(xì)胞淋巴瘤 小鼠腎癌細(xì)胞,Ranca細(xì)胞 人食道平滑肌細(xì)胞cDNAHESMC cDNA

NEC(人食管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

COLO 320(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0166NCI-H1650(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠肺泡巨噬細(xì)胞;NR8383[AgC11x3A; NR8383.1]

產(chǎn)品特點(diǎn)：
◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；
◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝；
◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測；
◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。