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優(yōu)化ELISA的重點之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號,從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留,在最后一步產(chǎn)生信號。而不充分的洗滌會導(dǎo)致差異和高背景,從而帶來不理想的結(jié)果。本文將為你介紹一些利用自動洗板機來洗滌ELISA平板的技巧。免疫分析,比如ELISA,一般包含兩個或以上的孵育步驟,中間以洗滌隔開。ELISA通常在96孔板中開展,其上包被了結(jié)合抗原或抗體。在封閉步驟后,包被后的平板首先與一抗或抗原孵育。隨后通過一些洗滌步驟去除未結(jié)合(低親和力)
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本試劑盒僅供研究使用。使用目的:本試劑盒用于測定雞血清,血漿及相關(guān)液體樣本中傳染性支氣管炎(IBV)表達。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞傳染性支氣管炎(IBV)表達。用純化的傳染性支氣管炎(IBV)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中傳染性支氣管炎(IBV)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的傳染性支氣管炎(IBV)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-抗體復(fù)合物,經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。
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使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中降鈣素原(PCT)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人降鈣素原(PCT)水平。用純化的人降鈣素原(PCT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入降鈣素原(PCT),再與HRP標(biāo)記的降鈣素原(PCT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素原(PCT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波
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ELISA試劑盒各環(huán)節(jié)中常見問題及解決方法
ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下,以期給同行帶來一些啟發(fā),提高試驗質(zhì)量。下面分析Elisa試驗操作中可能影響結(jié)果的原因,并給出相應(yīng)的解決辦法一、選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴(yán)格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。二、加樣可能原因:1)血清或血漿標(biāo)本分離不好即進行加樣;2)手工操作中,加樣板過 -
人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)ELISA試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)水平。用純化的人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C),再與HRP標(biāo)記的肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白C(SP-C)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn) -
ELISA檢測系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中最為廣泛最為靈敏的技術(shù)手段??墒窃谛吕鲜植僮鬟^程中總是會出現(xiàn)或大或小的問題,現(xiàn)在給我十個八個的從包被到顯色,一個工作日基本搞定。下面就由我拋磚引玉地來說一下,做ELISA的經(jīng)驗總結(jié):1、包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別,所以保存抗原很重要,我做重組蛋白時,師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。還有有的包被原可能不是蛋白,對于sheng物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被,
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使用目的:本試劑盒用于測定蝦樣本中白細(xì)胞介素6(IL-6)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中蝦白細(xì)胞介素6(IL-6)水平。用純化的蝦白細(xì)胞介素6(IL-6)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細(xì)胞介素6(IL-6),再與HRP標(biāo)記的白細(xì)胞介素6(IL-6)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素6(IL-6)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)
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使用目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中胎球蛋白A(FETU-A)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人胎球蛋白A(FETU-A)水平。用純化的人胎球蛋白A(FETU-A)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入胎球蛋白A(FETU-A),再與HRP標(biāo)記的胎球蛋白A(FETU-A)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胎球蛋白A