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上海西格生物科技有限公司
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當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>PCR相關(guān)試劑>>miRNA檢測(cè)系列>> HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒

HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒

參  考  價(jià):1248 - 4056
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

規(guī)格

25T 1248元 15盒可售

100TX20μl 4056元 15盒可售

更新時(shí)間:2024-05-22 09:13:43瀏覽次數(shù):170次

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貨號(hào) XG-P3028 規(guī)格 25T 、100TX20μl
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HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒

HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒

貨號(hào)

規(guī)格

分類

XG-P3028

25T

miRNA檢測(cè)系列

XG-P3028

100TX20μl

miRNA檢測(cè)系列

描述: TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒采用加 A 法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,加 A 法的反轉(zhuǎn)錄效率遠(yuǎn)高于莖環(huán)法,因 此,采用該方法可極大的提高檢測(cè)靈敏度(原理見(jiàn)圖 1)。 該試劑盒操作簡(jiǎn)單,僅需要兩步即可輕松完成 miRNA 的 cDNA 合成,合成的 cDNA 可用于所有 miRNA 的后續(xù)定 量檢測(cè)。反轉(zhuǎn)錄完畢后采用特異性的上游引物和接頭引物 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增,F(xiàn)AM 標(biāo)記 TaqMan 探針作為熒光報(bào)告基 團(tuán)進(jìn)行定量檢測(cè)(原理見(jiàn)圖 1)。  TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒專用于 miRNAs 分子的反轉(zhuǎn)錄試驗(yàn),轉(zhuǎn)錄獲得的 cDNA 產(chǎn)物用于 TaqMan 定量 PCR 方法檢測(cè) miRNAs 分子

儲(chǔ)存:請(qǐng)置于-20°C,可保存 2 年;避免反復(fù)凍融
操作方法
1 按以下組分在 0.2 ml EP 管中配制應(yīng)液
miRNA (5~100 ng/μl) 4 μl
5×TaqMan miRNA RT Solution A 1 μl
注意:不建議使用 Total RNA,Total RNA 試驗(yàn)結(jié)果通常差
于 miRNA。
2 在 PCR 儀上按以下條件進(jìn)行加 A 反應(yīng):
 37°C 30min
 85°C 5min
3 反應(yīng)完畢后,在上述 5μl 反應(yīng)體系中加入如下試劑,并
混合均勻。
10×TaqMan miRNA RT Primer 2 μl
10×TaqMan miRNA RT Solution B 2 μl
H2O 11 μl
4 在 PCR 儀上按以下條件進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng):
 30°C 5min
55°C 60min
 95°C 5min
獲得的 cDNA 產(chǎn)物可用于多個(gè)目標(biāo) miRNA 的檢測(cè)。反轉(zhuǎn)錄完畢后獲得的 miRNA cDNA,可加入 20~80μl ddH20 稀釋2~5 倍,通常取 2μl 即可用于 HG TaqMan miRNA 定量 PCR試劑盒檢測(cè)。


HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒


HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒

一、模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等;

二、引物:PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物,分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為T(mén)A克隆等過(guò)程中使用到的引物;

三、dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥(niǎo)苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過(guò)程,用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增;

四、Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴(kuò)增DNA鏈;

五、PCR buffer溶液:對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛,可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;

六、酶切體系:PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟,常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),用來(lái)判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;


HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒


HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí),要求RNA必須有Poly A,所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT,對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高,不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng),建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT,尤其適合模板豐度很低的情況(比如某個(gè)gene表達(dá)量很低)。選擇隨機(jī)引物時(shí),鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板,然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系,一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng,如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過(guò)250ng,可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物(<500bp)的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物(GSP)是某個(gè)基因序列的一部分,與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合,每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此,當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí),則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來(lái)就不相同,所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物,建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。

HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒

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克氏食道線蟲(chóng)PCR試劑盒

血吸蟲(chóng)ELISA試劑盒

人乳頭瘤病毒18PCR試劑盒

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毛滴蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒

胍基丁胺脲水解meiELISA試劑盒

核因子κB抑制物激meiαELISA試劑盒

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白細(xì)胞介su15ELISA試劑盒

Claspin蛋白ELISA試劑盒

 


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