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上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司
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養(yǎng)娃要悉心照料，同樣養(yǎng)細(xì)胞也需要無(wú)微不至的關(guān)懷，各種吃的穿的用的，更是一樣都不能少，為了這些“可愛”的細(xì)胞們，不知道有多少生物醫(yī)學(xué)科研人操碎了心。這不，zui近養(yǎng)的好好的細(xì)胞，這狀態(tài)說(shuō)差就差了，還不是細(xì)胞污染的原因，這究竟是什么情況？細(xì)胞培養(yǎng)基中的渾濁，究竟是什么？如果排除了污染，細(xì)胞培養(yǎng)基中的渾濁通常被解釋為金屬、蛋白和其他培養(yǎng)基組分的沉淀。沉淀物可能損害細(xì)胞健康，因?yàn)樗鼈兺ㄟ^(guò)螯合可移除養(yǎng)分和其他需要的組分，從而改變培養(yǎng)基的組成。沉淀物也是顯微鏡可見的，可能會(huì)干擾依賴成像的實(shí)驗(yàn)分析。產(chǎn)生沉淀的
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流式胞內(nèi)染色步驟（使用FIX&PERM固定破膜）制備好細(xì)胞懸液，取100ul（全血樣本：人100ul，小鼠30~50ul）染表面抗體，室溫避光孵育15min，不用洗滌↓加入FIX&PERMReagentA100ul室溫孵育15min↓加入3ml流式染色緩沖液（FlowCytometryStainingBuffer）300g離心5min棄上清收集細(xì)胞液體盡量倒干凈，不要?dú)埩簟郎u旋混勻沉淀，加入FIX&PERMReagentB100ul和胞內(nèi)抗體（同型對(duì)照管加入同等劑量的抗體）混勻，室溫避光孵育20
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細(xì)胞培養(yǎng)常見問(wèn)題--出現(xiàn)沉淀咋整?
細(xì)胞培養(yǎng)中會(huì)沉淀如何產(chǎn)生的呢？產(chǎn)生沉淀什么原因造成的，您知道嗎？跟著勁馬小編一起來(lái)研究研究！細(xì)胞培養(yǎng)中的沉淀如果排除了污染，細(xì)胞培養(yǎng)基中的渾濁通常被解釋為金屬、蛋白和其他培養(yǎng)基組分的沉淀。沉淀物可能損害細(xì)胞健康，因?yàn)樗麄兺ㄟ^(guò)螯合可移除養(yǎng)分和其他需要的組分，從而改變培養(yǎng)基的組成。沉淀物也是顯微鏡可見的，可能會(huì)干擾依賴成像的實(shí)驗(yàn)分析。產(chǎn)生沉淀的可能原因一、溫度變化在細(xì)胞培養(yǎng)中，溫度是引起沉淀的主要因素之一。當(dāng)遭遇溫度的變化時(shí)，高分子量血漿蛋白會(huì)從溶液中析出；熱失活和凍融循環(huán)能促進(jìn)蛋白降解和沉淀；因?yàn)?/div>WesternBlot，大名蛋白免疫印跡，小名“西方雜交”。作為定性定量?jī)砂押檬?，毫不夸張地說(shuō)，WB可以說(shuō)是實(shí)驗(yàn)室人人必會(huì)的技能之一，但并非每人都能做出一張的曝光圖，宛若夜深的樓宇燈火闌珊。今天就教給新同學(xué)們新手WB避坑指南，避開那些容易出現(xiàn)的問(wèn)題，讓你以后的WB曝光圖賞心悅目，小伙伴十人九慕，導(dǎo)師贊不絕口。問(wèn)題一：有些同學(xué)的WB圖，一大塊黑色，找條帶全靠猜。這種情況原因有三：1.封閉不充分除了生物素標(biāo)記的抗體需要使用0.5%-2%的BSA封閉，建議大部分蛋白用5%脫脂奶粉在4℃條件下過(guò)夜封閉。酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)?zāi)鷾?zhǔn)備好了嗎?
酶聯(lián)免疫試劑盒采樣前的準(zhǔn)備及包裝和運(yùn)輸要求：1.準(zhǔn)備無(wú)菌容器、樣品標(biāo)簽、采樣登記表、記號(hào)筆、樣品運(yùn)輸過(guò)程中所需物品(如包裝箱、冷藏設(shè)備)等。2.在樣品采集、運(yùn)輸、儲(chǔ)存等過(guò)程中，應(yīng)采取必要的措施防止交叉污染和環(huán)境污染及食品中微生物的數(shù)量和生長(zhǎng)能力發(fā)生變化。3.樣品應(yīng)在接近原有儲(chǔ)存溫度的條件下傳送，冷凍、冷藏的樣品應(yīng)能達(dá)到規(guī)定溫度，樣品送到實(shí)驗(yàn)室應(yīng)越快越好，如果路途遙遠(yuǎn)，應(yīng)將不需冷凍的樣品都保存在2℃-5℃環(huán)境中。4.冷凍產(chǎn)品可以冷凍運(yùn)輸或者在允許解凍的情況下冷藏運(yùn)輸，但樣品溫度不得超過(guò)8℃，一旦解原代細(xì)胞培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的步，其步驟包括取材→分離→培養(yǎng)和維持，今天小編給大家?guī)?lái)原代細(xì)胞培養(yǎng)的一些技巧，希望大家能有所收獲！原代細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用1.為研究生物體細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的手段；2.為傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件；3.服務(wù)于臨床實(shí)踐，用于藥物篩選等。原代細(xì)胞培養(yǎng)之分離注意事項(xiàng)一、組織塊培養(yǎng)法1.組織塊接種后的前3天，在觀察和移動(dòng)的過(guò)程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng)，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會(huì)脫落飄起。2.加入的培養(yǎng)液不宜過(guò)多，避免浸泡的組織塊受每個(gè)產(chǎn)品都有著屬于各自的長(zhǎng)處，在體外細(xì)胞能夠長(zhǎng)時(shí)間繁殖且不要加入任何血清進(jìn)去就可以的合成培養(yǎng)基就稱之為無(wú)血清培養(yǎng)基，現(xiàn)在其已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞來(lái)制備單克隆抗體，重組蛋白和病毒抗原等。那么，無(wú)血清培養(yǎng)基又存在著哪些優(yōu)缺點(diǎn)呢？無(wú)血培養(yǎng)基有點(diǎn)主要如下：1.由于其不會(huì)含有雜志蛋白，從而使得細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)更容易實(shí)現(xiàn)組分控制；2.無(wú)血清培養(yǎng)基可以進(jìn)行選擇性地促進(jìn)特殊類型的細(xì)胞生長(zhǎng)；3.其還能選擇生長(zhǎng)因子的類型、濃度和別的誘導(dǎo)因子，從而促使細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換為誘導(dǎo)細(xì)胞分化的培養(yǎng)基；4.可以防止血勁馬文獻(xiàn):神經(jīng)干細(xì)胞與血管性癡呆大鼠海馬膽堿能神經(jīng)元變化的相關(guān)性
神經(jīng)干細(xì)胞與血管性癡呆大鼠海馬膽堿能神經(jīng)元變化的相關(guān)性孫玉華，耿利嬌，趙靜雅，賀維亞，李保平(河南大學(xué)淮河醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南省開封市475001)文章亮點(diǎn)：1有研究顯示，神經(jīng)干細(xì)胞移植可以增加血管性癡呆模型大鼠腦內(nèi)膽堿能神經(jīng)細(xì)胞，其機(jī)制可能為外源性神經(jīng)干細(xì)胞在移植區(qū)增殖、分化，并可能促進(jìn)了內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的分化、遷移，改善了大鼠腦內(nèi)局部的微環(huán)境。2神經(jīng)干細(xì)胞移植后膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶陽(yáng)性細(xì)胞增多，從而有效促進(jìn)膽堿能神經(jīng)元分化及生長(zhǎng)，乙酰膽堿增多，使大鼠海馬區(qū)神經(jīng)功能恢復(fù)，并促進(jìn)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的有效改
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